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線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒

型 號

產品時間2024-11-21

所屬分類氧化磷酸化系列

報價600

產品描述:線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒(熒光法)活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。
正常情況下,細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態,細胞內活性氧(ROS)

產品概述

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產品名稱

規格

貨號

線粒體活性氧產生速率(ROS)生化檢測試劑盒(熒光法)

100/96  

EY-01S151

 

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測定意義:                         

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。

正常情況下,細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態,細胞內活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破,細胞內活性氧水平過多,就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸,使機體出現氧化應激,同時,活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷,導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。

因此,通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理:

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜,在線粒體內被酯酶水解,形成無熒光的DCFHDCFH迅速與ROS反應生成熒光物氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF) 根據上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合,線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品:

多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。

 



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試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。              

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現配現用。

試劑四:液體×1支,4℃保存。

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1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。

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(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

(3)按細胞數量計算

活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

(4)按液體體積計算

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