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總抗氧化能力(DPPH法)生化檢測試劑盒

型 號

產品時間2023-11-06

所屬分類氧化與抗氧化系列

報價300

產品描述:總抗氧化能力(DPPH法)生化檢測試劑盒測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

產品概述

商品屬性:

產品名稱:總抗氧化能力(DPPH法)生化檢測試劑盒

規格:100/96 50/48 

貨號 : EY-01S165

測試方法:微量法 可見分光光度法  

分類:氧化與抗氧化系列

商品詳情:

研究意義:

測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測定原理:

DPPH·為穩定的自由基 ,溶于甲醇,乙醇等極性溶劑中,在515nm處有大吸收。向 DPPH·溶液中加入抗氧化劑時,會發生脫色反應,因此可用吸光度的變化并以Trolox作為對照體系量化抗氧化物質的抗氧化能力。

自備實驗用品:

恒溫水浴鍋、低溫離心機、酶標儀、96孔板和蒸餾水。

粗酶液提取:

1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。


5.png



ADH測定操作:

1. 分光光度計預熱30 min,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。

測定步驟:

1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

2、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

3、操作表:

試劑名稱μL

測定孔

樣本

20

試劑二

760

試劑三

10

試劑四

10


將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。

注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

NAD-MDH活力單位的計算:

1、血清(漿)NAD-MDH活力的計算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總:反應體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;2000:細胞或細菌總數,2000萬。

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