注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:休斯新孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Neospora hughsiPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
休斯新孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
磷脂酰乙醇25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,中文名稱: 磷脂酰乙醇其他名稱: 乙醇磷甘油酯;腦磷脂;L-α-磷酯酰乙醇;1,2-二脂酰-sn-甘油-3-磷-O-乙醇;3-Sn-磷脂酰乙醇英文名稱: PE其他名稱: L-α-Cephalin;L-α-Phosphatidylethanolamine;Cephalin;Kephalin;1,2-Diacyl-sn-glycero-3-phospho-O-ethanolamine;3-sn-Phosphatidylethanolamine產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%
N,N,N,N-四甲基乙二其他名稱: 四甲替乙二;四甲基乙撐二;N,N,N’,N’-四甲基-1,2-乙二;1,2-雙(二甲氨基);1,2-雙(二甲基氨基)乙;四甲基-1,2-亞乙基二英文名稱: TEMED其他名稱: TMEDA;N,N,N′,N′-Tetramethylethylenediamine;1,2-Di(dimethylamino)ethane產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%包裝:100毫升/500毫升CAS號(hào):110-18-9
N,N,N,N-四甲基對(duì)二二鹽鹽英文名稱: TMPD其他名稱: N,N,N N-Tetramethyl-P-phenylenediamine 2HC1;Wurster's Reagent產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%包裝:1克/5克/25克CAS號(hào):637-01-4C6H4[N(CH3)2]2 ·2HC1=237.17
1-(3-二甲基丙基)-3-乙基碳二亞中文名稱: 1-(3-二甲基丙基)-3-乙基碳二亞其他名稱: 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞;1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二;1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞;1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳酰亞英文名稱: EDC其他名稱: WSC;N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide;N-Ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide產(chǎn)品規(guī)格: 特純,98%包裝:5克/25克/100克
1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞鹽鹽100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,中文名稱: 1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞鹽鹽其他名稱: 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞鹽鹽;1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞鹽鹽;1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞鹽鹽;1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞鹽鹽英文名稱: EDC•HC1其他英文名稱: EDAC•HC1;N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide;1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride
酚酞單磷環(huán)己鹽英文名稱: Phenolphthalein monophosphate bis(cyclohexylammonium) salt其他名稱: Phenolphthalein monophosphate dicyclohexylammonium salt產(chǎn)品規(guī)格: BR,90%包裝:1克CAS號(hào):14815-59-9C20H15O7P · 2C6H13N=596.65
聚丙烯酰其他名稱: 三號(hào)凝聚劑;雙丙丙烯酰235溶液;絮凝劑3號(hào)英文名稱: PAM其他名稱: PHⅢ;Polyacrylamide;2-Propenamide homopolymer產(chǎn)品規(guī)格: BR,MV>300萬包裝:250克/1公斤CAS號(hào):9003-05-8
甲酰英文名稱: Benzamide其他名稱: Benzene carbonamide;Benzoic amide產(chǎn)品規(guī)格: CP包裝:25克/100克/500克CAS號(hào):55-21-0C7H721.13
休斯新孢子蟲PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格alpha,alpha'-Dibromo-p-xylene 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
Skirrow Agar Base,Modified 質(zhì)量規(guī)格:供HPLC法測(cè)定
D(-)-Norvaline 質(zhì)量規(guī)格:>98%,P糖蛋白抑制劑
Tricyclohexyl phosphine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Egg-Yolk Salt Agar B 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Disodium oxalate 質(zhì)量規(guī)格:>95%
ALUMINUM MONOSTEARATE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Vanillic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
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