產品背景:
Caspase全稱為含半胱的天冬蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一類蛋白酶家族,成員較多,在人類,已經鑒定了11種不同的caspase,根據其蛋白酶序列的同源性可分為3個亞族:Caspase-1亞族包括 Caspase-1、4、5、11;Caspase-2亞族包括Caspase-2、9; Caspase-3亞族包括Caspase-3、6、7、8、10。起細胞凋亡執行者作用的是caspase3,6,7。
產品名稱 | Caspase-9 活性分析試劑盒(比色法) |
英文名稱 | Caspase-9 Assay Kit (Colorimetric) |
貨號 | EY-01X8540 |
產品規格 | 20T/50T/100T |
有效期 | 12個月 |
保存 | -20oC避光 |
產品特點:
更簡單:無需抗原抗體反應,基于小分子化學反應的檢測方法簡單高效,反應僅需要幾分鐘。
更靈敏:無需抗體,檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴散,即便是單個增殖細胞也能準確檢測。
更快速:無需過夜,省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟,完成整個檢測周期僅需2.5小時。
更準確:無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細胞核邊緣清晰完整。
更兼容:對樣品幾乎無損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記,能夠同時檢測細胞其他性狀特征
實驗步驟:
1.細胞培養
(以6孔板為參考,其他培養孔可根據實驗需要進行適當調整。)每孔1x10^5-3x10^6細胞接種于6孔板中,培養至正常生長階段。
注:細胞接種量,可根據細胞大小、生長速度、以及實驗處理周期等調整。
2.細胞干預或者處理
(選做)可以根據實驗需要對細胞進行藥物或者其他刺激干預處理。
3.細胞共孵育培養
根據預實驗結果,用細胞培養基按比例稀釋溶液,或者按比例在孔板培養液中加入適量的溶液與細胞共同孵育,同時設置不添加組作為陰性對照組。每孔加入配制的稀釋后的培養液共同孵育2h,去除舊培養液。
注意事項:
1.由于使用96孔板進行檢測,如果你的細胞要養48 h或更長,建議不要吝嗇96-孔板的四周邊孔,這32個邊孔不能使用,建議加入滅菌PBS以飽和中間64個孔的水分。因為細胞培養過程中,邊孔的水分蒸發很快,培養液及里面的藥物會出現濃縮現象,細胞的狀況就復雜了。
2.溶劑在低溫情況下會凝固,使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
3.一般4oC避光保存兩周內有效,保存在-20度長期保存,避免反復凍融,小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解,尤其當變為灰綠色時就不能再用了。
4.Formazan溶解液結凍或產生沉淀時可以37℃水浴孵育以促進溶解,并且必須在全部溶解并混勻后使用。
5.孵育時,須避光。
6.有致癌性,用的時候小心,有條件帶那種透明的簿膜手套。配成的需要無菌,對菌很敏感。
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